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亦称“超低温保藏法”。菌种保藏方法之一。将菌种悬浮于无菌的10%甘油或10%二甲基亚砜水溶液中,装入安瓿,然后降温(控制温度下降速率为每分钟1℃),使悬液冻结,至-35℃后,用纸包好安瓿,立即放入液氮贮存器(又称“液氮冰箱”,液相为-196℃,气相为-150℃)中。此法可长期保存菌种,并能减少菌种变异。恢复培养时,从贮存器中取出安瓿,迅速置于38~40℃水浴中摇动,使悬液融化,开启安瓿,将菌种接种于适宜的培养基中。